BAFF Western blot實驗檢測

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B細(xì)胞活化因子屬腫瘤壞死因子超家族成員(TNFSF13B)，主要由單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及T細(xì)胞產(chǎn)生，可促進B細(xì)胞成熟和分化，在免疫應(yīng)答中起重要作用，并與自身免疫密切相關(guān)。膜型BAFF主要表達于抗原提呈細(xì)胞，蛋白酶可使之水解而轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄訠AFF。

通常檢測BAFF的時候可以一起檢測BCL-1，NF-KB等指標(biāo)一起檢測。

Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。

BAFF Western blot實驗檢測

與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。

經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。

注意事項：

1.  一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過預(yù)實驗確定*條件。
 

2.  顯色液必須新鮮配置使用，zui后加入H₂O₂。
 

3.  DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細(xì)。