一：
WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)的4個(gè)條件：
1、凝膠洗脫：轉(zhuǎn)移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中，將無法在膜上進(jìn)行分析。
2、處理期間仍截留在膜上：在轉(zhuǎn)移后的處理過程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上。
3、吸附到膜上：在轉(zhuǎn)移過程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進(jìn)行分析。
4、處理過程中可接近：被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測(cè)試劑接觸，如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無法檢測(cè)。
以上是小編為大家講解的產(chǎn)品代測(cè)的四個(gè)條件，那么小編接下來進(jìn)一步講解基本過程及注意事項(xiàng)有哪些？
二：WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)的基本過程：
1、獲取細(xì)胞或組織裂解物。
2、根據(jù)檢測(cè)蛋白的位置選擇合適的裂解。
3、選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
4、蛋白定量。
5、電泳分離蛋白質(zhì)。
6、轉(zhuǎn)膜：根據(jù)不同的檢測(cè)目的和待測(cè)蛋白的特性,選擇合適的膜類型。
7、封閉：去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景。
8、一抗孵育。
三：WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)需要注意以下幾點(diǎn)：
1、選擇適合檢測(cè)標(biāo)本種屬的一抗。
2、選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體。
3、選擇適用于WB實(shí)驗(yàn)方法的一抗。
4、二抗孵育：孵育條件一般為室溫1-2小時(shí)。
5、結(jié)果分析和檢測(cè)：凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)或者暗室曝光到膠片。
6、底物孵育：選擇顯色或者化學(xué)發(fā)光底物。一般傾向于化學(xué)發(fā)光，靈敏度高且背景低，節(jié)省抗體用量。
以上就是小編為大家介紹的全部內(nèi)容，希望對(duì)大家有所幫助。
您的位置：
更新時(shí)間：2020-04-13 
瀏覽次數(shù)：2571
